组织工程与重建外科杂志 ›› 2024, Vol. 20 ›› Issue (3): 275-.
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摘要:
方法 分别采用 2种电转染方式 Optimization4及 Optimization6和脂质体转染试剂RNAiMAX,将modGFP转染到hADSC中去。应用流式细胞分析仪和荧光显微镜分析,比较不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况;通过细胞死活染色,评估转染后24 h细胞的存活情况;将更优的电转方式与RNAiMAX用于modVEGFA转染 hADSC,收集其培养 24 h 的上清用于人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,hUVECs)成管和transwell迁移实验,并与基质胶混合后注射于裸鼠皮下,通过大体观、HE染色及免疫荧光染色,分析其在体内促进血管再生的情况。结果 Optimization6 电转转染 hADSC 的效率为 87.75%±1.52%,高于 Optimization4 转染组(80.85%±1.48%)和 RNAiMAX 转染组(81.80%±1.08%),且荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。3种转染方式对细胞的毒性均较小,无统计学差异。与RNAiMAX相比,Optimization6电转能更高效地介导 modVEGFA 转染 hADSC,能更好地促进体外 hUVECs成管和迁移,皮下血管再生的效果也更佳。
结论相比于 RNAiMAX 和 Optimization4电转染,Optimization6电转方式转染 hADSC的效率更高,蛋白表达高效,且能在体内外快速高效促进血管再生。