摘要:
目的 探究Yes相关蛋白(YAP)对脂肪移植存活率的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养3T3-L1细胞,分别用YAP siRNA和带有慢病毒载体的YAP过表达质粒进行处理,分为阴性对照siRNA(NC)组、YAP-si1组、YAPsi2组、YAP-si3组,慢病毒载体(Vector)组、YAP过表达(YAP)组。通过EdU检测细胞增殖活性,然后诱导3T3-L1细胞成脂分化,在细胞分化的早期和晚期,油红O染色观察脂肪细胞内脂滴的积聚并使用Image-pro plus6.0软件进行统计,利用甘油三酯检测试剂盒检测细胞的甘油三酯含量,利用PCR和Western blot检测成脂分化相关基因和蛋白的表达。在体内实验中,构建裸鼠皮下脂肪移植模型,8只小鼠随机分为阴性对照 siRNA(NC)组、YAP敲低(si-YAP)组,腺相关病毒(AAV)载体组、YAP过表达(AAV-YAP)组,每组2只。每只小鼠在4个不同部位各注射0.2 mL脂肪,总注射量为0.8 mL。然后在各组的脂肪局部分别注射0.2 mL等体积NC siRNA、YAP siRNA、腺相关病毒载体或腺相关病毒载体介导的YAP过表达质粒。在移植后1、2、4周收集移植脂肪,称量脂肪质量和体积,评估移植后脂肪的存活率,并用HE染色和免疫荧光染色观察脂肪结构、油囊数量、存活脂肪细胞数量。结果 细胞实验结果显示,与对照组相比,YAP敲低组的3T3-L1细胞的增殖活性与凋亡比例无明显变化,油红O染色面积增加(P<0.05),甘油三酯含量增加(P<0.05),成脂分化相关基因和
蛋白表达增加(P<0.05)。反之,与慢病毒载体组相比,过表达YAP组的3T3-L1细胞的增殖活性增加,凋亡比例无明显变化,油红O染色面积减少(P<0.05),甘油三酯含量降低(P<0.05),成脂分化相关基因和蛋白表达降低(P<0.05)。体内实验结果显示,相比NC组,si-YAP组脂肪的质量和体积增加,脂肪结构更加完整,油囊数量减少,存活脂肪细胞增多。而相比AAV载体组,AAV-YAP组脂肪的质量和体积减少,脂肪结构完整性降低,油囊数量增加,存活脂肪细胞减少。结论:YAP对脂肪移植存活率有明显的抑制作用。此外,YAP通过调控PPARγ通路影响3T3-L1成脂分化。
刘雨欣, 孙佳铭, 余力.
Yes相关蛋白对脂肪移植存活率的影响及其机制研究
[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2024, 20(6): 672-.
LIU Yuxin, SUN Jiaming, YU Li. Effect of Yes-related protein on the survival rate of fat transplantation and its mechanism[J]. Journal of Tissue Engineering and Reconstructive Surgery, 2024, 20(6): 672-.