组织工程与重建外科杂志

组织工程与重建外科杂志 >

2011 , Vol. 7 >Issue 4: 186 - 190+206

DOI: https://doi.org/10.3969/j.issn.1673-0364.2011.04.002

论著

睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究

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  • 200433,上海市 第二军医大学附属长海医院整形外科；上海市组织工程研究重点实验室,上海市 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科,200011

网络出版日期: 2020-07-23

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Research of Leydig Stem Cells: Separation, Purification and Identification In Vitro

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Online published: 2020-07-23

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摘要

目的 改进Leydig干细胞的分离及纯化方法,观察其生物学特性并进行鉴定.方法　通过胶原酶消化、差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法,从大鼠睾丸内获得Leydig干细胞.以条件培养液进行培养,采用CCK法测定增殖能力.通过PDGFRα、LIFR及3β-HSD免疫组织化学染色鉴定Leydig干细胞.经定向诱导分化后,检测Leydig细胞的睾酮分泌能力.结果　每个睾丸约可获得83 000个干细胞,经免疫组织化学染色分析,PDGFRα阳性率为(98.0±0.8)％.在条件培养液中培养的SLCs增殖明显,在1个月内能稳定维持其干性而未向Leydig细胞系分化.免疫组织化学染色结果表明,PDGFRα、LIFR阳性表达,3β-HSD为阴性表达.Leydig干细胞在含有T3和HCG的培养液中培养后,第5天即可测到睾酮分泌,分化后的细胞3β-HSD+.结论　 由差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法能获得纯化的PDGFRα+/LHRˉ细胞,这些细胞符合SLCs所必须具有的特征.采用该方法获取SLCs,操作简便,细胞损伤小并且获取纯度高.

关键词： Leydig干细胞; 磁性活化细胞分选; 细胞培养; 分化; 鉴定

本文引用格式

肖斌，王晓云，周广东，周英晋，毕宏达，朱吉，张敬德，邢新 . 睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2011 , 7(4) : 186 -190+206 . DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2011.04.002

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