外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2007, Vol. 12 ›› Issue (05): 460-463.doi: 10.16139/j.1007-9610.a1880

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大鼠胰岛分离、纯化技术改良

苏畅, 张正筠, 陈曦, 顾卫琼, 周光文, 李宏为,   

  1. 上海交通大学附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所,上海交通大学附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所,上海交通大学附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所,上海交通大学附属瑞金医院内分泌科,上海交通大学附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所,上海交通大学附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所 上海200025,上海200025,上海200025,上海200025,上海200025,上海200025
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:探讨SD大鼠胰岛分离、纯化的较优方案,并评价依该法分离所得胰岛的生物学特性。方法:以浓度为0.75mg/ml的Ⅺ型胶原酶经胆管充分灌注大鼠胰腺;完整分离后以37℃水浴振荡消化17min,Dextron70不连续密度梯度(1.091、1.081及1.037)离心法分离、纯化胰岛;以DTZ染色鉴定胰岛并计算得率,AO-PI染色检测胰岛活性,糖刺激试验判定胰岛功能,胰岛"细胞免疫细胞化学鉴定"细胞,光镜观察体外培养胰岛的形态学变化。结果:纯化后,每只大鼠胰岛收获量为(743.60±43.07)个,胰岛纯度>90%,胰岛细胞活率>90%。在45min内每10个胰岛细胞在低糖和高糖刺激下分泌的胰岛素浓度分别为(25.35±7.00)μIU/ml和(86.48±12.75)μIU/ml。结论:依改良后的分离纯化方案分离大鼠胰岛可获得高纯度高活率的胰岛细胞,且细胞形态正常、功能良好。

关键词: 胰岛, 细胞分离, 细胞学技术, 大鼠

Key words: Islets of lanerhans, Cell separation, Cytologyical techniques, Rats