组织工程与重建外科杂志 ›› 2021, Vol. 17 ›› Issue (6): 511-.

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Torin1、Nutlin⁃3a 促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究

  

  • 出版日期:2021-12-01 发布日期:2022-01-11

  • Online:2021-12-01 Published:2022-01-11

摘要: 目的 探索 Torin1、Nutlin?3a 对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。 方法将 Torin1 和Nutlin?3a 作用于 3T3 细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用 Western blot 检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用 qRT?PCR 检测心肌细胞成熟相关基因 mRNA 的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。 结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin?3a 和 Torin1 可以抑制 3T3 细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。 Western blot 检测结果显示,Nutlin?3a 组和 Torin1 组 cTnT、cTnI 蛋白表达量相比 DMSO 组有增高的趋势。 qRT?PCR 结果表明,Torin1 处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。 免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中 Torin1 组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。 膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1 组和 Nutlin?3a 组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1 组和 Nutlin?3a 组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明 Torin1 和 Nutlin?3a 处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。 结论 用 Torin1 和 Nutlin?3a 处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR 信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。