论著

HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

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  • 河北北方学院;空军总医院血液科;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室

网络出版日期: 2020-07-23

Expression and Purification of Human HMGB1 A-Box and Identification of Its Induction-Promoting Effects on Mesenchymal Stem Cells

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  • 1 Hebei North University,Hebei 075000,China;2 Department of Hematology,Air Force General Hospital,Beijing 100142,China;3 Laboratory of Hematology,Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 102206,China.

Online published: 2020-07-23

摘要

目的克隆人HMGB1 A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM-T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE观察表达量。HIS-link层析柱纯化重组人HMGB1 A-box,蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT-PCR扩增得到了261 bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box。将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。

本文引用格式

曹小芳,王恒湘,何梓铭,王芳,杨洋,郭子宽 . HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2012 , 8(6) : 301 -304 . DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2012.06.001

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