HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

doi:10.3969/j.issn.1673-0364.2012.06.001

组织工程与重建外科杂志 ›› 2012, Vol. 8 ›› Issue (6): 301-304.doi: 10.3969/j.issn.1673-0364.2012.06.001

• 论著 • 下一篇

HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

曹小芳，王恒湘，何梓铭，王芳，杨洋，郭子宽

河北北方学院；空军总医院血液科；军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室

发布日期:2020-07-23

Expression and Purification of Human HMGB1 A-Box and Identification of Its Induction-Promoting Effects on Mesenchymal Stem Cells

CAO Xiaofang¹,WANG Hengxiang^1,2,HE Ziming³,WANG Fang³,YANG Yang³,GUO Zikuan³

1 Hebei North University,Hebei 075000,China;2 Department of Hematology,Air Force General Hospital,Beijing 100142,China;3 Laboratory of Hematology,Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 102206,China.

Published:2020-07-23
Contact: 国家自然科学基金　　（30871018,30971068）；国家863课题　　（2011AA02101）

摘要/Abstract

摘要： 目的克隆人HMGB1 A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM-T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE观察表达量。HIS-link层析柱纯化重组人HMGB1 A-box,蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT-PCR扩增得到了261 bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box。将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。

中图分类号:

R329.2

曹小芳，王恒湘，何梓铭，王芳，杨洋，郭子宽. HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2012, 8(6): 301-304.

CAO Xiaofang,WANG Hengxiang,HE Ziming,WANG Fang,YANG Yang,GUO Zikuan. Expression and Purification of Human HMGB1 A-Box and Identification of Its Induction-Promoting Effects on Mesenchymal Stem Cells[J]. Journal of Tissue Engineering and Reconstructive Surgery, 2012, 8(6): 301-304.

[1]	纪鸥洋　方均燕　宋阿会　佟琰　魏珊　陈志豪　刘英莉. 间充质干细胞外泌体对腹膜间皮细胞高糖损伤的作用研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2022, 18(4): 294-.
[2]	郑毅　许鹏　刘凯. 促进间充质干细胞外囊泡产生的研究进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2022, 18(2): 166-.
[3]	刘欣, 綦才辉, 王振竞, 吕娜, 王少婷, 王淑萍. 胰高血糖素样肽-1激动剂Exendin-4 刺激小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的转录组学体外研究[J]. 诊断学理论与实践, 2022, 21(03): 367-373.
[4]	Abdulsamad Ghanem 柯荣湖穆雄铮吴颖之. ＲＢＰ４在成骨机制中的蛋白组学研[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2021, 17(5): 378-.
[5]	郭天赐刘爱峰陈继鑫余伟杰. 间充质干细胞源性外泌体对骨性关节炎治疗机制的研究进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2021, 17(3): 262-.
[6]	曹红刚, 苏媛, 赵强, 薛锋, 汉英, 王存邦, 白海, 吴涛. 肝炎相关重症再生障碍性贫血诊治一例报道并文献复习[J]. 诊断学理论与实践, 2021, 20(06): 579-581.
[7]	方均燕, 宋阿会, 佟琰, 丁峰, 刘英莉. 脓毒症大鼠来源的外泌体对WJ-MSC的免疫调控能力的影响[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2020, 16(3): 223-229.
[8]	雷杰，何承建，贺梦吟. 三磷酸腺苷对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响及机制研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2019, 15(6): 389-392.
[9]	宋楠，何爱娟. 猪骨髓间充质干细胞体外构建软骨修复关节软骨缺损的实验研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2019, 15(5): 318-334.
[10]	徐勇，刘春燕，刘延群，李亚强，段亮，姜格宁. 激光打孔脱细胞基质复合骨髓间充质干细胞构建组织工程气管软骨[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2019, 15(2): 72-76.
[11]	徐媛，郭遥，袁斯明，王慜，陈海妮，沈卫民. PPAR-gamma信号通路对Hem-MSCs体外成脂分化的影响[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2019, 15(1): 1-9.
[12]	宋阿会，佟琰，刘英莉. BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞的增殖、凋亡及细胞因子的影响[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2019, 15(1): 5-9.
[13]	曹璐，综述，王帅，张霓霓，黄桂林，审校. 间充质干细胞旁分泌作用对外分泌腺腺体损伤后功能恢复的研究进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2018, 14(4): 223-226.
[14]	陈锦富，耿倚云，王大平. 定向诱导间充质干细胞成软骨分化相关活性因子研究进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2018, 14(4): 227-230.
[15]	程燕咏，王佳怡，蒋云凤，孙宇. 骨髓间充质干细胞对七氟烷所致的原代神经元凋亡及细胞活性的影响[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2018, 14(1): 24-27.

HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

Expression and Purification of Human HMGB1 A-Box and Identification of Its Induction-Promoting Effects on Mesenchymal Stem Cells

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价