论文

蛋白磷酸酶2A调节亚基PR55-γ基因克隆及真核细胞表达

展开
  • 上海交通大学医学院附属瑞金医院急诊科;

网络出版日期: 2020-07-25

摘要

目的:构建蛋白磷酸酶2A(PP2A)调节亚基PR55-γ(PPP2R2C)慢病毒过表达质粒,并在U87细胞株中稳定过表达PPP2R2C,探讨PPP2R2C对PP2A活性的影响。方法:通过反转录(RT)-PCR扩增PPP2R2C的编码序列并克隆至慢病毒载体PWPIR-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中,获得PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体,通过酶切鉴定、质粒测序确定质粒克隆成功,用磷酸钙沉淀法将质粒转导至U87细胞中,流式细胞分析术检测U87细胞转导效率,蛋白质印迹法检测目的蛋白表达,通过PP2A蛋白免疫共沉淀法检测PP2A活性。结果:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建及U87细胞株稳转过表达PPP2R2C成功,并且细胞转导效率超过90%,外源性PPP2R2C表达率上升近23倍,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性。结论:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建成功,并通过慢病毒转导细胞U87细胞株表达PPP2R2C成功,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性,为进一步研究PPP2R2C功能奠定基础。

本文引用格式

魏波华, 梁惠欣, 王翠翠, 陈连祥, 叶静, 陆一鸣, . 蛋白磷酸酶2A调节亚基PR55-γ基因克隆及真核细胞表达[J]. 内科理论与实践, 2014 , 9(03) : 198 -202 . DOI: 10.16138/j.1673-6087.a0338

Options
文章导航

/