外科理论与实践 ›› 2003, Vol. 8 ›› Issue (05): 397-399.doi: 10.16139/j.1007-9610.a1059
安萍,魏家臣,李世拥,于波,蔡慧芸
发布日期:2020-07-25
Published:2020-07-25
摘要： 目的:克隆人FasL全长cDNA并构建其真核表达载体。方法:采用RT鄄PCR法从健康人外周血单核细胞中扩增包含全部阅读框架的FasL全长cDNA,将之与pGEM鄄TEasy质粒连接、测序。构建pcDNA3.1鄄FasL真核表达载体,用脂质体介导方法转染人直肠癌8348细胞,检测FasL表达情况。结果:RT鄄PCR扩增的FasL产物经限制性内切酶酶切后生成的片段符合预期大小。克隆测序证实所得的FasLcDNA序列与GeneBank序列完全一致。pcDNA3.1鄄FasL重组质粒经EcoRI+XhoI双酶切后,电泳显示898bp目的片段和pcDNA3.1载体片段,证明重组质粒正确。转染直肠癌8348细胞后,用RT鄄PCR方法检测FasL表达阳性。结论:采用RT鄄PCR方法成功克隆了人FasL全长cDNA并构建了其真核表达载体,为进一步研究FasL功能奠定了基础。
安萍,魏家臣,李世拥,于波,蔡慧芸. 人FasL全长cDNA的克隆及其真核表达载体的构建[J]. 外科理论与实践, 2003, 8(05): 397-399.
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