组织工程与重建外科杂志 ›› 2008, Vol. 4 ›› Issue (3): 146-149.doi: 10.3969/j.issn.1673-0364.a334

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TRADD基因外显子的拼接及重组腺病毒的构建

丁先超,田永静,王丹茹,张余光,钱云良   

  1. 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科
  • 发布日期:2020-07-23

  • Published:2020-07-23
  • Contact: 上海市教育委员会基金(04BB15)

摘要: 目的构建含有人TRADD基因片段的重组腺病毒载体。方法从人肝组织中提取总RNA,逆转录得到cDNA。按照TRADD基因4个外显子的基因序列设计引物,分别扩增得到4个外显子的基因片段。对4个外显子进行基因拼接,得到全长的TRADD片段。利用AdEasy系统构建TRADD重组腺病毒,测定病毒滴度,并转染成纤维细胞。结果拼接成功939kb的TRADD基因,行PCR扩增重组腺病毒中TRADD基因,在略小于1000kb处见到明显的TRADD条带。结论构建成功的含有TRADD基因片段的重组腺病毒,可用于转染人成纤维细胞,用于检测TRADD对病理性瘢痕成纤维细胞的影响。

关键词: 肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白, 克隆, 基因拼接, 腺病毒

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