肝脏脱细胞基质微颗粒促进 ＨｅｐＧ２ 细胞球状体形成与肝相关功能分化的研究

摘要/Abstract

摘要： 目的探索肝脏脱细胞基质（ｄＥＣＭ）微颗粒对３Ｄ培养ＨｅｐＧ２细胞的肝相关功能状态的影响。方法通过肝脏门静脉灌流脱细胞液等成分，制得肝脏ｄＥＣＭ。用组织学特殊染色、扫描电镜及免疫组织化学等方法鉴定脱细胞效果以及ｄＥＣＭ成分。通过液氮冷冻研磨将ｄＥＣＭ制备成微颗粒，通过差速离心分离不同粒径范围的微颗粒。利用超低吸附培养板进行ＨｅｐＧ２细胞球状体３Ｄ培养，向培养基中加入ｄＥＣＭ微颗粒，观察其对ＨｅｐＧ２细胞球状体的形成及其肝相关功能状态的影响。利用ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ检测相关蛋白的分泌和基因表达。结果制得的ｄＥＣＭ无细胞结构，保留了细胞外基质的相关成分。在液氮研磨与差速离心分离后，可获得粒径在微米级的ｄＥＣＭ微颗粒。ｄＥＣＭ微颗粒可以促进ＨｅｐＧ２细胞形成更致密的球状体；加入ｄＥＣＭ微颗粒的ＨｅｐＧ２球状体，细胞分泌白蛋白和尿素氮的水平增加（Ｐ＜０.０５）；ＰＣＲ结果表明，加入ｄＥＣＭ微颗粒后，细胞的肝功能相关基因的表达水平显著提升（Ｐ＜０. ０５）。结论肝脏脱细胞基质微颗粒可以促进ＨｅｐＧ２细胞球状体的形成和ＨｅｐＧ２细胞球状体的肝相关功能分化。

关键词: 细胞外基质, ＨｅｐＧ２细胞, 细胞球状体, 组织工程, ３Ｄ培养

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