组织工程与重建外科杂志 ›› 2013, Vol. 9 ›› Issue (3): 125-128.doi: 10.3969/j.issn.1673-0364.2013.03.002
李志勇，王恒湘，毕晓云，黄舒，郭子宽，郭志坤
LI Zhiyong,WANG Hengxiang,BI Xiaoyun,HUANG Shu,GUO Zikuan,GUO Zhikun
摘要： 目的 探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法.方法 采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组.各组标本经氯化铵溶解红细胞后,分别进行成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和MSC传代培养.计每组CFU-F及第0、1和2代MSC数量.流式细胞仪测定细胞表型,组织化学法检测细胞体外成骨和成脂肪能力.结果 尿激酶处理组样本CFU-F数平均为(33.71±23.54),接近于未凝固对照组样本(40.43±21.29)(n=7,P＞0.05),显著高于机械法处理组(13±11.91)(n=7,P＜0.01)和凝固未处理组(3.71±3.89)(n=7,P＜0.01).储存8或16h后的标本,各组CFU-F形成能力下降,而未凝固对照组和尿激酶处理组数量仍显著高于另外两组(P＜0.05).标本储存不同时间进行MSC传代培养,未凝固对照组及尿激酶处理组细胞数量无明显差别,但均显著高于凝固未处理组及机械处理组.各组MSC均表达CD73和CD90,不表达CD31和CD45.经特异诱导后,各组MSC均呈现碱性磷酸酶活性,细胞内出现亲油红O染料的脂肪滴.结论 对于已经凝固的骨髓标本而言,尿激酶预处理是分离培养MSC的良好途径.
中图分类号:
