摘要:
目的 通过研究大鼠骨髓内皮祖细胞转染 PAX6 基因后角膜内皮细胞相关特征性基因的表达,探讨其作为角膜内皮细胞移植的种子细胞的可能性。
方法 采用密度梯度离心法分离出大鼠骨髓单核细胞,接种到纤连蛋白铺层的细胞皿,以 EGM-2 培养液选择培养,获得大鼠骨髓内皮祖细胞。 通过免疫荧光染色检测 CD31、CD34、CD133、LDL、UEA-1 等骨髓内皮祖细胞基因表达情况;病毒转染 PAX6 基因进入内皮祖细胞,蛋白免疫印迹鉴定转染成功与否;实时荧光定量 PCR 检测 AQP-1、ZO-1、ATP1A1、SNAI1、SNAI2 角膜内皮细胞相关特征性基因的表达情况。 结果 分离获得的细胞在选择培养基中形成类铺路石样克隆胞在选择培养基中形成类铺路石样克隆,细胞间连接紧密,荧光染色显示内皮祖细胞基因表达且 PAX6 基因可被成功转染,实时荧光定量 PCR 检测显示转染后的细胞角膜内皮细胞功能性蛋白基因表达上升,纤维化蛋白基因表达下降。
结论 大鼠骨髓内皮祖细胞通过过表达 PAX6 基因可被诱导向角膜内皮细胞转分化,转染后的细胞具有作为角膜内皮细胞移植种子细胞的潜力。