诊断学理论与实践 ›› 2013, Vol. 12 ›› Issue (05): 532-536.doi: 10.16150/j.1671-2870.a0413
石朔, 王利华, 郭睿, 张敏, 苗莹, 张淼, 李彪,
摘要： 目的:观察不同浓度的氯化钴(CoCl2)对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法:用100、300、600、900、1 200μmol/L的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、36、48 h用Hoechst 33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡;CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;确定最佳诱导浓度600μmol/L后,分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48 h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达;确定最佳诱导时间后,用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1 200μmol/L CoCl2处理H9C2心肌细胞12 h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果:在600~1 200μmol/L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol/L CoCl2诱导12 h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡,诱导12~48 h范围内,12 h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高;100~1 200μmol/L CoCl2诱导H9C2心肌细胞12 h,其中600μmol/L CoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高。结论:CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol/L,此时最佳时间为12 h。
