诊断学理论与实践

诊断学理论与实践 ›› 2011, Vol. 10 ›› Issue (05): 423-427.doi: 10.16150/j.1671-2870.a1328

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治疗基因VEGF_(165)和报告基因NIS共表达载体的构建和鉴定

王利华, 张淼, 石朔, 郭睿, 李彪,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科;
  • 出版日期:2011-10-25 发布日期:2011-10-25

  • Online:2011-10-25 Published:2011-10-25

摘要： 目的:利用内部核糖体进入位点(IRES)序列,构建含有血管内皮生长因子(VEGF165)和人钠碘同向转运体(NIS)的真核双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,并在体外检测NIS蛋白和VEGF165蛋白在HEK293细胞中的表达。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增得到目的基因VEGF165和NIS,通过酶切将其连接克隆至pIRES载体以构建pIRES-VEGF165-NIS质粒,再通过脂质体将构建好的质粒转染入HEK293细胞,并采用蛋白印迹法和免疫荧光法检测VEGF165和NIS蛋白的表达。结果:成功构建了双基因双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,且其受巨细胞病毒(CMV)极早期基因启动子调控。蛋白印迹法检测显示,VEGF165和NIS可同时在HEK293细胞中表达,而免疫荧光显示转染的HEK293细胞可同时表达VEGF165蛋白和NIS蛋白。结论:IRES序列调控VEGF165和NIS双基因可在细胞中同时独立表达,为进一步构建双基因表达重组腺病毒,并利用人NIS作为报告基因,实时监测VEGF165治疗基因的表达和分布奠定基础。

关键词: 治疗基因, 报告基因, 血管内皮生长因子, 钠碘同向转运体, 共表达

Key words: Therapeutic gene, Reporter gene, Vascular endothelial growth factor, Sodium iodide symporter, Co-expression