内科理论与实践 ›› 2011, Vol. 6 ›› Issue (04): 295-297.doi: 10.16138/j.1673-6087.a1403

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应用酵母双杂交技术筛选与癌性锚蛋白重复序列相互作用的蛋白

包玉洁, 戴强, 杨文燕, 程芃, 王碧君, 张燕捷,   

  1. 上海交通大学医学院附属第三人民医院消化内科;
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要: 目的:筛选与癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)相互作用的蛋白。方法:构建诱饵(Bait)质粒pGB-Psmd10-1,采用β-半乳糖苷酶滤膜分析检测其自身转录活性,以Bait质粒筛选人Hela细胞MATCHMAKER cDNA文库,共转染重复验证阳性克隆,并测序鉴定。结果:成功构建Bait质粒,经验证对报告基因LacZ无自激活作用。以Bait质粒筛选人Hela细胞cDNA文库,获得83个克隆,其中5个克隆经重复验证确定为阳性克隆,测序结果显示其cDNA为Psmc4的3段不同剪接体(NM_006503.2,NM_153001.1)。结论:在人Hela细胞中,Psmc4为与Gankyrin相互作用的蛋白。

关键词: 癌性锚蛋白重复序列, 酵母双杂交, Psmc4, Hela细胞

Key words: Gankyrin, Yeast double hybridization, Psmc4, Hela cell