外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2004, Vol. 9 ›› Issue (03): 221-223+229.doi: 10.16139/j.1007-9610.a1198

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shRNA抑制SGC7901胃癌细胞绿色荧光蛋白基因的表达

马晋平,詹文华,汪建平,彭俊生,高劲松,朱孝峰,殷勤伟   

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  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:观察针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(smallhairpinRNA,shRNA)表达载体(SHipU6GFP)对SGC7901胃癌细胞中GFP的抑制作用。方法:设计针对GFP基因的shRNA序列,构建SHipU6GFP质粒。采用质粒pCXGFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3.3kb)质粒,应用LipofectamineTM2000将pCXGFP质粒和SHipU6GFP质粒转染SGC7901细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果:质粒SHipU6GFP经酶切电泳后,出现3.3kb和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHipU6GFP质粒。SGC7901细胞中观察到转染pCXEGFP质粒和SHipU6GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。结论:shRNA可以有效地抑制SGC7901细胞中GFP基因的表达。

关键词: RNA干扰, 短发夹RNA, 绿色荧光蛋白, 胃肿瘤

Key words: RNA interference, Small hairpin RNAs, GFP, Stomach neoplasms