外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2004, Vol. 9 ›› Issue (03): 208-211.doi: 10.16139/j.1007-9610.a1194

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毛细管电泳在检测大肠癌hMLH1基因突变中的应用

冯波,郑民华,石先哲,陆爱国,李健文,王明亮,董峰,许国旺   

  1. 上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,大连化学物理研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,大连化学物理研究所 上海200025 ,上海200025 ,大连116011 ,上海200025 ,上海200025 ,上海200025 ,上海200025 ,大连116011
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:建立应用毛细管电泳(CE)联合激光诱导荧光检测(LIF)技术分析单链构象多态性(SSCP)检测人大肠癌hMLH1基因点突变的方法。方法:以PCR法扩增42例散发性大肠癌病人与20名健康志愿者的外周血基因组DNAhMLH1基因第12外显子,采用CELIF法进行SSCP分析,对异常片段用CE直接测序鉴定;研究不同筛分介质(线性聚丙烯酰胺LPA)浓度、分离温度和分离电压对CE行为的影响。结果:42例散发性大肠癌hMLH1基因第12外显子经CESSCP分析发现4例(9.52%)有突变,CE测序证实为T1151A的杂合子点突变,20名健康志愿者未发现突变。较高浓度的LPA(4%～6%)、较低分离温度(20℃)和较高分离电压(9kV)有助于单链DNA峰分离。结论:调整适宜的LPA浓度、分离温度和分离电压可提高CE分析SSCP的效率。应用CELIF技术SSCP分析检测hMLH1基因点突变过程快速、高效、重复性好,适合临床大样本筛查,有望成为检测基因突变的新方法。

关键词: 毛细管电泳, 结直肠癌, hMLH1基因, 单链构象多态性, 基因突变

Key words: Capillary electrophoresis, Colorectal cancer, hMLH1 gene, Single,strand conformation polymorphism(SSCP), Gene mutation