组织工程与重建外科杂志

组织工程与重建外科杂志 ›› 2008, Vol. 4 ›› Issue (5): 263-266.doi: 10.3969/j.issn.1673-0364.a380

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应用AdEasy腺病毒载体系统构建血管内皮生长因子165重组腺病毒

高全文，宋慧锋，柴家科，柳春明   

  1. 中国人民解放军总医院第一附属医院烧伤整形科;中国人民解放军总医院
  • 发布日期:2020-07-23

Construction of Recombinant Adenovirus Vector Carrying the Vascular Endothelial Growth Factor 165 Using the AdEasy System

Gao Quanwen,SONG Huifen,CHAI Jiake,LIU Chunming   

  • Published:2020-07-23

摘要： 目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建血管内皮生长因子165(VEGF165)重组腺病毒,并在293T细胞中扩增。方法将PCR获取的VEGF165基因酶切并插入到pAdTrack-CMV中,构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack- VEGF165.经Pme I酶切线性化后.采用电穿孔转化到事先电转化腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落。提取质粒并用Pac I酶切鉴定,线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒,荧光显微镜下观察绿色荧光表达,并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度。结果经限制性内切酶检测、基因测序及和绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出10~9 pfu/mL的高滴度重组腺病毒。结论成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒载体,为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础。

关键词: 腺病毒, 血管内皮生长因子165, 基因工程

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