内科理论与实践 ›› 2018, Vol. 13 ›› Issue (06): 358-363.doi: 10.16138/j.1673-6087.a1320
王尧, 王宁, 王晓, 周罗成, 王海嵘,
发布日期:2020-07-25
Published:2020-07-25
摘要： 目的:通过构建血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)的内皮生长因子样结构域(D2)、富含丝氨酸/苏氨酸结构域(D3)及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大肠埃希菌表达体系,以获得TM-D23-GFP融合蛋白。方法:从美国国家生物技术信息中心查询TM的D23结构域、GFP的氨基酸序列,进行密码子优化和全基因合成,利用双酶切法将目标基因插入表达载体PET30a中,转化DE3菌株、诱导表达,通过镍离子-亚胺二乙酸-琼脂糖凝胶树脂(Ni-iminodicitic acid-sefinose resin,Ni-IDA)亲和层析、Q Sepharose TM FF离子交换层析纯化,最终得到TM-D23-GFP融合蛋白。结果:经酶切和测序鉴定证实,TM-D23片段已正确插入PET30a表达载体中;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测结果证实,含His-tag标签的TM-D23-GFP融合蛋白成功表达,且其相对分子质量约为60 000。结论:构建的TMD23-GFP融合蛋白可在DE3表达菌株中进行表达,为后期融合蛋白的功能研究打下基础。
王尧, 王宁, 王晓, 周罗成, 王海嵘,. 血栓调节蛋白内皮生长因子样结构域和富含丝氨酸/苏氨酸结构域在大肠埃希菌中的表达[J]. 内科理论与实践, 2018, 13(06): 358-363.
| [1] | 陈辉 侯爱华 王培培 梅晓峰. 增强型绿色荧光蛋白标记膀胱癌外泌体的构建及其体外示踪作用[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2022, 18(4): 300-. |
| [2] | 王明燚, 朱燕. 荧光标记人透明带融合蛋白质粒的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞内的表达[J]. 诊断学理论与实践, 2021, 20(06): 557-561. |
| [3] | 刁文晶, 皇甫昱婵, 朱威南, 刘婧娴, 刘瑛, 沈立松. 耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分离情况及碳青霉烯酶基因研究[J]. 诊断学理论与实践, 2019, 18(06): 655-661. |
| [4] | 李莉, 王晓, 王尧, 康健, 周罗成, 王海嵘. 血栓调节蛋白表皮生长因子样结构功能域在毕赤酵母中的表达[J]. 诊断学理论与实践, 2017, 16(01): 55-59. |
| [5] | 陈伟琴, 董雷鸣, 奚晓东,. 诱骗寡核苷酸下调白血病细胞中组织因子高表达的研究[J]. 诊断学理论与实践, 2013, 12(02): 179-184. |
| [6] | 黄秋兰, 侯惠丽, 范德平,. 头孢菌素折点变化对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌药物敏感性及产超广谱β内酰胺酶菌株分布的影响[J]. 诊断学理论与实践, 2013, 12(02): 221-223. |
| [7] | 吕晓杰，周广东，马俐君，刘霞，曹谊林. 增强型绿色荧光蛋白转染活细胞效率的研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2011, 7(5): 248-253. |
| [8] | 丁小邦，王健，曹谊林. GFP小鼠皮肤成纤维细胞皮下注射后转归的实验研究[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2011, 7(5): 261-265. |
| [9] | 管小俊, 宋琳, 郭雪君, 徐卫国,. 携带绿色荧光蛋白基因慢病毒转染的大鼠骨髓间充质干细胞的干细胞特性检测[J]. 诊断学理论与实践, 2011, 10(06): 527-530. |
| [10] | 刘德莉. 绿色荧光蛋白－逆转录病毒的包装、筛选及克隆技术[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2007, 3(3): 165-166. |
| [11] | 周佳，沈尊理. 绿色荧光蛋白基因转染骨髓基质干细胞技术的应用进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2007, 3(2): 110-111. |
| [12] | . 细菌感染的抗菌药物治疗和细菌耐药性监测试题答案[J]. 外科理论与实践, 2006, 11(04): 370-372. |
| [13] | . 2006年外科理论与实践杂志函授继续教育——细菌感染的抗菌药物治疗和细菌耐药性监测[J]. 外科理论与实践, 2006, 11(03): 285-286. |
| [14] | 洪秀华. 细菌感染的抗菌药物治疗和细菌耐药性监测(1)[J]. 外科理论与实践, 2005, 10(05): 493-499+504. |
| [15] | 郑佐娅,高丰厚,洪理泉,赵卫国,王鸿利. 谷胱甘肽S-转移酶-肌钙蛋白I(28～110aa)表达纯化及稳定性的初步研究[J]. 诊断学理论与实践, 2005, 4(01): 59-61. |
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