诊断学理论与实践

诊断学理论与实践 ›› 2009, Vol. 8 ›› Issue (06): 617-622.doi: 10.16150/j.1671-2870.a1637

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TIGAR基因真核表达载体的构建及在HepG_2细胞中的作用初探

顾志冬, 倪培华, 吴蓓颖, 吴华成, 樊绮诗, 肖家诚,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科;上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系;上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科;
  • 出版日期:2009-12-25 发布日期:2009-12-25

  • Online:2009-12-25 Published:2009-12-25

摘要： 目的:构建TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子(TIGAR)全长cDNA的真核表达载体pEGFP-TIGAR,观察TIGAR在人肝细胞HepG2中的作用。方法:RT-PCR技术扩增获得TIGAR全长cDNA,将扩增的产物克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,构成pEGFP-TIGAR的真核表达重组质粒。利用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期、MIB-1(Ki-67抗原测定)法检测细胞增殖、实时荧光PCR检测mRNA表达和Western-blot检测蛋白质的表达。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-TIGAR,经DNA测序与GenBank中的人TIGARcDNA序列一致。荧光显微镜观察到转染重组质粒的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。检测结果显示,转染pEGFP-TIGAR质粒的HepG2晚期凋亡细胞明显减少(P<0.05);S期细胞百分数则明显增加(P<0.05),增殖能力明显增高(P<0.05)。结论:本实验成功构建了pEGFP-TIGAR真核表达质粒,过表达的TIGAR可降低HepG2细胞发生晚期凋亡和促进细胞增殖,为进一步研究TIGAR基因在肿瘤细胞中作用提供了基础。

关键词: TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子, 人肝细胞癌细胞, 凋亡

Key words: TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator gene, Human hepatocellular carcinoma, Apoptosis