诊断学理论与实践

诊断学理论与实践 ›› 2009, Vol. 8 ›› Issue (02): 165-170.doi: 10.16150/j.1671-2870.a1757

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DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG_2细胞的作用

倪培华, 徐洪, 胡亮, 胡翊群, 姜叙诚,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系;上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室;上海交通大学医学院基础医学院病理学教研室;
  • 出版日期:2009-04-25 发布日期:2009-04-25

  • Online:2009-04-25 Published:2009-04-25

摘要： 目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用。方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Westernblot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致。LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P

关键词: 损伤调节自噬调质, DRAM, 自噬, 细胞凋亡, 载体

Key words: Damage-regulated autophagy modulator, Autophagy, Apoptosis, Vector