外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2011, Vol. 16 ›› Issue (05): 455-460.doi: 10.16139/j.1007-9610.a2743

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慢病毒介导的RNA干扰对小鼠胰腺星状细胞中半乳糖凝集素-1基因沉默效应的研究

袁中旭, 汤东, 陆子鹏, 卫积书, 张静静, 蒋奎荣, 苗毅,   

  1. 南京医科大学第一附属医院胰腺外科江苏省临床医学研究院肿瘤生物研究所;
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:评价慢病毒介导的RNA干扰技术对小鼠胰腺星状细胞(mPSC)中半乳糖凝集素-1(galectin-1)基因的沉默效应,并观察其对mPSC增殖的影响。方法:设计并合成3条galectin-1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒PLKO.1-PURO载体中。从慢病毒包装转染的293T细胞,获得病毒上清感染的mPSC;采用嘌呤霉素(2μg/μL)筛选出慢病毒感染成功的mPSC。实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测mPSC中galectin-1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测mPSC的增值能力。结果:PCR扩增和测序表明成功构建galectin-1慢病毒干扰载体,可以有效沉默mPSC中galectin-1基因的表达。构建的RNAi慢病毒载体感染mPSC后galectin-1 mRNA表达量同对照组比较,分别为(19.4±4.8)%、(6.2±4.3)%、(27.6±5.7)%,galectin-1蛋白表达量同对照组比较分别为(25.9±3.6)%、(10.8±4.1)%、(30.2±3.2)%。稳定的galectin-1沉默mPSC在第4天细胞增殖能力下降(22.9±2.7)%(P

关键词: 胰腺星状细胞, 半乳糖凝集素-1, 慢病毒, RNA干扰

Key words: Pancreatic stellate cells, Galectin-1, Lentivirus vector, RNA interference