诊断学理论与实践 ›› 2015, Vol. 14 ›› Issue (02): 113-119.doi: 10.16150/j.1671-2870.a0797
王筱婧, 赵点点, 郁静嘉, 焦培林, 孙立昊, 陶蓓, 宣言, 刘建民, 王卫庆, 赵红燕,
摘要: 目的:探讨Fox O1基因在高糖环境对成骨细胞增殖和分化能力影响中的作用,并观察其与氧化应激间的关系。方法:1将小鼠成骨细胞株MC3T3-E1铺板,约90%的细胞汇合后分为正常糖对照组、高糖组、高糖+抗氧化剂组3组;2靶向构建慢病毒载体,慢病毒侵染MC3T3-E1细胞后,将体外培养的MC3T3-E1分为正常细胞正常糖对照组(NG)、正常细胞高糖组(HG)、无关sh RNA转染对照组(NC)、Fox O1-sh RNA慢病毒转染组(Fox O1-sh RNA)4组。通过CCK-8检测成骨细胞增殖能力,测定碱性磷酸酶(ALP)活性并染色,检测茜素红染色,用实时PCR测定不同时间点成骨标志基因Runx2转录因子(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(ostcocalcin,OC)、ALP m RNA的表达及反映氧化应激相关超氧化物歧化酶、生长抑制及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA damage 45,Gadd45)的m RNA表达,并用蛋白印迹法检测Fox O1的蛋白表达水平。结果 :1与正常糖对照组相比,高糖组的成骨细胞增殖和分化能力及Runx2、ALP、OC基因m RNA表达水平显著降低,而加入抗氧化剂后上述能力则均有不同程度恢复,高糖组的超氧化物歧化酶和Gadd45 m RNA表达水平显著增高。2Fox O1-sh RNA组的Fox O1 m RNA及蛋白表达水平均明显低于高糖组,同时Fox O1-sh RNA组的Runx2、ALP m RNA表达水平亦显著低于高糖组。结论:高糖环境下,成骨细胞增殖、分化能力的下降与氧化应激密切相关,而Fox O1基因在氧化应激抑制成骨细胞的增殖、分化过程中起到一定的保护作用。