诊断学理论与实践 ›› 2013, Vol. 12 ›› Issue (02): 189-193.doi: 10.16150/j.1671-2870.a0509

• 论文 • 上一篇    下一篇

PTEN及其突变体可诱导慢病毒表达系统的构建

林佳菲, 顾志冬, 倪培华, 刘湘帆, 方旭前, 樊绮诗,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科;上海交通大学医学院检验系;
  • 出版日期:2013-04-25 发布日期:2013-04-25

  • Online:2013-04-25 Published:2013-04-25

摘要: 目的:构建可诱导表达野生型或突变型第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的慢病毒表达体系,为进一步研究PTEN与肿瘤间的关系提供理想的实验工具。方法:提取甲状腺癌、肺癌及其癌旁组织的RNA,经反转录后扩增PTEN片段,将其连接入慢病毒载体,与病毒包装质粒共转染人胚肾T细胞(293T)细胞,获得病毒。将其感染MDA-MB-231细胞,用嘌呤霉素筛选,获得稳定表达的细胞株。采用蛋白印迹法检测稳定转染的细胞株中PTEN基因的表达情况,用软琼脂克隆形成实验检测细胞株的克隆形成能力。结果:在甲状腺癌和肺癌中发现PTEN突变体;蛋白印迹检测结果证实野生型和突变型PTEN的慢病毒表达体系构建成功。突变型PTEN的克隆形成能力强于野生型PTEN。结论:发现了PTEN突变体,并成功构建了野生型和突变型PTEN基因的可诱导慢病毒表达体系,突变型PTEN不但有抑癌作用,还有致癌作用。

关键词: 第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因, 突变型, 慢病毒表达载体, 机制

Key words: Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10, Mutant, Lentiviral expression vector, Mechanism