诊断学理论与实践

诊断学理论与实践 ›› 2011, Vol. 10 ›› Issue (06): 527-530.doi: 10.16150/j.1671-2870.a1299

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携带绿色荧光蛋白基因慢病毒转染的大鼠骨髓间充质干细胞的干细胞特性检测

管小俊, 宋琳, 郭雪君, 徐卫国,   

  1. 上海交通大学医学院附属新华医院呼吸内科;
  • 出版日期:2011-12-25 发布日期:2011-12-25

  • Online:2011-12-25 Published:2011-12-25

摘要： 目的:研究携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是否仍具有干细胞的特性。方法:培养大鼠骨髓MSC,采用携带GFP基因的慢病毒转染MSC。用不同感染复数(multiplicity of infection,MOI,分别设定为5、10、25、50)转染MSC,在荧光显微镜下观察转染效果,流式细胞仪测定最佳MOI的转染效率和携带GFP的MSC(MSC-GFP)表面抗原CD表型,采用成脂肪、成骨、成软骨分化液诱导MSC-GFP分化,荧光显微镜和化学染色观察诱导分化结果。结果:MOI=25时细胞死亡少,转染效果最佳,转染效率为97%。MSC-GFP不表达CD11b/c(2%)、CD45(3%),表达CD29(100%)、CD90(99%),可向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化,符合干细胞特性。结论:携带GFP基因的慢病毒转染的骨髓MSC维持着干细胞特性。本研究结果为MSC在体内示踪研究提供理论基础。

关键词: 间充质干细胞, 绿色荧光蛋白, 慢病毒载体, 机制

Key words: Mesenchymal stem cell, Green fluorescent protein, Lentiviral vectors, Mechanism