外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2009, Vol. 14 ›› Issue (01): 46-48.doi: 10.16139/j.1007-9610.a2173

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小鼠肝星状细胞的分离、培养及鉴定方法

张强, 陈曦, 苏畅, 张正筠, 杨军, 韦瑶, 周光文, 李宏为,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院外科瑞金医院器官移植中心上海消化外科研究所;
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:探索BALB/c小鼠肝星状细胞(HSCs)分离、纯化的可行方案,并评价依该法分离所得HSCs的生物学特性。方法:经肝门静脉先用不含钙镁离子的Hank液充分灌洗,再以浓度为1mg/mL的Ⅳ型胶原酶灌注BALB/c小鼠肝脏。取肝后,完整分离后碾碎,37℃水浴振荡30min,Percoll连续密度梯度(60%)离心法分离、纯化HSCs,苔盼蓝染色检测HSCs活性,结蛋白免疫细胞化学鉴定HSCs,光镜观察体外培养HSCs的形态学变化。结果:纯化后每只小鼠HSCs收获量约为(5.5±0.4)×105个,HSCs纯度>90%,HSCs细胞活率>90%。结论:本实验建立的的分离纯化方案可获得高纯度高活率的小鼠HSCs。

关键词: 肝星状细胞, 细胞分离, 原代培养, 小鼠

Key words: Hepatic stellate cells, Cell separation, Primary culture, Mice