内科理论与实践 ›› 2019, Vol. 14 ›› Issue (06): 366-370.doi: 10.16138/j.1673-6087.a0387
康健, 朱莹莹, 张姣姣, 王宁, 王海嵘, 周罗成,
摘要： 目的:进一步研究多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因过表达在法尼醇促进氟康唑耐药白念珠菌凋亡过程中的机制。方法:从美国国家生物技术信息中心搜索获得MDR1基因的mRNA,利用双酶切法将MDR1基因的ORF插入质粒pCaEXP的MET3启动子后面,构建可过表达MDR1基因的pCaEXP-MDR1重组质粒。利用醋酸锂法将重组质粒转染至白念珠菌,制备MDR1过表达的白念珠菌作为实验组,转染pCaEXP空质粒的白念珠菌作为对照组。在2组中加入200μmol/L浓度的法尼醇培养后,采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测2组生长曲线,应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测并比较2组菌株的胱天蛋白酶3(caspase 3)的活化程度,菌株内谷胱甘肽(glutathione, GSH)的含量及细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)含量,进而比较不同组菌株在细胞凋亡、细胞内氧化还原及氧化应激水平上的差异。结果:与对照组比较,加入法尼醇后,MDR1过表达的实验组白念珠菌的繁殖生长曲线明显下降,其差异在24 h后有统计学意义(P=0.039 2)。实验组细胞内还原型GSH的含量(P=0.000 1)及氧化型GSH含量(P=0.004 4)下降,ROS含量(P=0.003 8)及胱天蛋白酶3活性(P=0.029 0)上升。结论:MDR1表达的增加使法尼醇显著减少白念珠菌细胞内GSH的含量,增加细胞内ROS含量,细胞抗氧化能力下降,胱天蛋白酶3活性增加,促使白念珠菌凋亡。
