外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2010, Vol. 15 ›› Issue (04): 416-422.doi: 10.16139/j.1007-9610.a2519

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利用新型载体运转MDR1 siRNA以逆转胰腺癌化疗耐药性的研究

洪智贤, 张太平, 赵玉沛, 李汇华, 李方, 郑连芳,   

  1. 中国医学科学院北京协和医院外科;中国医学科学院北京协和医院基础所病理科;中国医学科学院北京协和医院核医学科;
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的:以新型载体运转MDR1 siRNA导入胰腺癌细胞株后,观察其多药物耐药基因(MDR1)的表达及其对胰腺癌化疗耐药性的影响。方法:采用RNA干扰技术,构建可用于包装成自我复制rAAV病毒载体的质粒,以运转不同长度的MDR1 siRNA。采用实时PCR检测MDR1 mRNA的表达,Western印迹法检测总P-糖基化蛋白(P-gp)的表达水平,用流式细胞仪检测细胞表面的P-gp表达,并从不同层面检测胰腺癌细胞株P-gp表达的抑制率,从而筛选出最佳的质粒载体。采用MTT检测IC50值,进行各载体逆转胰腺癌细胞株化疗耐药性的研究。结果:拟用于构建自我复制rAAV病毒载体的25-mer MDR1 siRNA质粒能有效地将目的基因MDR1 siRNA导入胰腺癌细胞株,并予稳定的表达,发挥作用。导入胰腺癌细胞株的MDR1 siRNA能有效地在mRNA水平上沉默MDR1基因,显著抑制其表达,使其蛋白产物P-gp的表达明显减少,及其在细胞膜上的数量显著降低。结果能有效、显著地逆转胰腺癌细胞株的化疗耐药性,转染前SW1990/ADM细胞对ADM的IC50值约是转染后的50倍。结论:采用可用于构建新型sc-rAAV载体的质粒作为投递siRNA的工具,并选择MDR1为研究靶点,通过实验证实该策略在逆转胰腺癌化疗耐药性中的有效性。

关键词: 胰腺癌化疗, 多药物耐药, 化疗耐药, RNA干扰, sc-rAAV病毒载体

Key words: Pancreatic cancer, MDR1, Chemoresistance, siRNA, sc-rAAV