外科理论与实践

外科理论与实践 ›› 2004, Vol. 9 ›› Issue (04): 295-297+300.doi: 10.16139/j.1007-9610.a1228

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特异性siRNA抑制肝星状细胞Smad2表达

罗海峰,吴志勇,邱江锋,陈炜,张志奇,孟方斌   

  1. 上海第二医科大学附属仁济医院普外科,上海第二医科大学附属仁济医院普外科,上海第二医科大学附属仁济医院普外科,上海第二医科大学附属仁济医院普外科,上海第二医科大学附属仁济医院普外科,上海第二医科大学附属仁济医院普外科 上海200127 ,上海200127 ,上海200127 ,上海200127 ,上海200127 ,上海200127
  • 发布日期:2020-07-25

  • Published:2020-07-25

摘要： 目的构建Smad2特异性siRNA表达克隆,探讨其在肝星状细胞(HSCs)中是否能够有效地抑制Smad2的表达。方法利用生物软件进行Smad2mRNA二级结构模拟,选择合适的靶位点,使用pBSKU6载体表达Smad2特异性siRNA,在体外转染HSC鄄T6细胞株,应用RT鄄PCR和Western鄄blot技术检测Smad2mRNA和蛋白的表达情况。结果成功构建siRNA表达克隆,转染后Smad2在基因和蛋白的表达水平均受到了明显抑制。在构建成功的4个克隆中,CR4抑制mRNA表达最为显著,达90%以上;抑制蛋白表达率也达到80%左右。同时CR1和CR4能有效地下调HSC分泌Ⅲ型胶原。结论在体外实验中,载体表达的特异性siRNA可有效地抑制HSCs中Smad2的表达,并可对激活的HSCs分泌细胞外基质产生有益的影响。

关键词: RNA干扰, 肝星状细胞, 转化生长因子, 肝纤维化

Key words: RNA interference, Hepatic stellate cells, Transforming growth factor, Liver fibrosis