诊断学理论与实践 ›› 2014, Vol. 13 ›› Issue (05): 505-510.doi: 10.16150/j.1671-2870.a0877
褚庆华, 张婕, 孙奋勇,
摘要： 目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞"拯救"实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的"拯救"实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能"拯救"mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 :mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。
