目的 探究脂肪源性间充质干细胞外泌体(hADSC-Exo)在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的作用机制。方
法 分离并鉴定 hADSC 与 hADSC-Exo。将人真皮微血管内皮细胞(hMECs)分为对照组、200 μg/L 重组人表皮生长
因子处理的阳性对照组与 100 μg/mL hADSC-Exo 处理的 hADSC-Exo 组,通过 CCK-8、划痕实验、血管形成实验,
检测 hMECs 增殖、迁移与血管形成能力。60 只大鼠随机分为对照组、阳性对照组、hADSC 组与 hADSC-Exo 组,每
组 15 只。所有大鼠于背部制备全层皮肤缺损创面,每组分别于大鼠尾静脉注射 200 μL 1×PBS、100 μg/kg 重组人
表皮生长因子、200 μL 约含 1×106 个 hADSC 的 1×PBS、200 μL 含 200 μg hADSC-Exo 的 1×PBS。每组随机保留 3
只大鼠,分别于 0、3、7、10、12 d 拍摄创面图像并计算创面面积。每组其余大鼠随机分为 4 组,每组 3 只,分别
于 3、7、10、12 d 采集未愈合创面组织并制成石蜡切片,HE、Masson 染色观察创面愈合情况,免疫组化检测炎症
与创面愈合相关蛋白表达情况。结果 细胞实验结果显示,与对照组相比,阳性对照组、hADSC-Exo 组细胞增殖活性、
细胞迁移率升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量增加(P<0.05);与阳性对照组相比,hADSC-Exo 组细胞增殖活
性、细胞迁移率进一步升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量进一步增加(P<0.05)。动物试验结果显示,与对照
组相比,阳性对照组、hADSC 组与 hADSC-Exo 组皮肤创面愈合率、CD206、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Collagen Ⅲ、
水通道蛋白 3(AQP3)表达水平升高(P<0.05),肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、CD68、角蛋白
1(KRT1)表达水平与 Collagen Ⅰ /Collagen Ⅲ比例下降(P<0.05),新生表皮组织更为完整,厚度增加,表皮下可
见成纤维细胞增殖,创面新生胶原沉积明显增加 ;与阳性对照组相比,hADSC 组与 hADSC-Exo 组 CD206、Collagen
Ⅰ、Collagen Ⅲ、AQP3 表达水平进一步升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、CD68、KRT1 表达水平进一步下降(P<0.05)。
结论 hADSC-Exo 能够增强 hMECs 增殖、迁移、血管生成能力,降低创面炎症反应水平,促进创面细胞增殖、胶
原重塑,加速创面愈合,具有成为皮肤创伤治疗药物的潜力。