诊断学理论与实践

诊断学理论与实践 ›› 2015, Vol. 14 ›› Issue (05): 455-460.doi: 10.16150/j.1671-2870.a0716

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基于凝集素芯片的蛋白质糖基化修饰检测方法

杨舟, 王世东, 程磊, 程莉, 陶生策, 宋凯, 张庆华,   

  1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室;中国科学院上海生命科学研究院;上海华盈生物医药科技有限公司;上海交通大学系统生物医学研究院;
  • 出版日期:2015-10-25 发布日期:2015-10-25

  • Online:2015-10-25 Published:2015-10-25

摘要： 目的:建立针对组织和血清样本中蛋白质糖基化的凝集素芯片检测方法 ,并结合凝集素印迹法验证,以实现样品间糖基化修饰差异的高通量筛选。方法:采用包含91种凝集素的凝集素芯片,利用生物素标记的组织总蛋白质样品,比较实验的重复性及不同上样量的芯片实验效果。利用生物素标记的去高丰度蛋白质血清和全血清样品,比较两者芯片实验的检出情况及全血清样品不同上样量的芯片实验效果。以最优条件筛选癌组织与癌旁组织样品之间及不同疾病患者血清样品之间的糖基化修饰差异,采用凝集素印迹法验证凝集素芯片实验结果。结果:芯片重复性良好(r>0.94),组织样品在0.625~1.250μg/m L时实验效果较佳;去高丰度蛋白质血清和全血清样品以高浓度上样时(≥20μg/m L),两者检出相近。标记后的全血清样品取2μL稀释至150μL时,实验效果最佳。筛选出检测信号有差异的凝集素经凝集素印迹法验证,结果与芯片检测一致。结论:该凝集素芯片实验体系稳定、可靠,可用于筛选临床样本间的糖基化修饰差异,有助于发现疾病相关的糖蛋白生物标志物。

关键词: 凝集素芯片, 糖基化修饰, 组织, 血清, 生物标志物

Key words: Lectin microarray, Glycosylation, Tissue, Serum, Biomarker